Annaleigh Ashford, Broadway'de You Can't Take It With You'da canlandırdığı Essie karakteriyle Tony Ödülü, Drama Desk Ödülü ve Outer Critics Circle Ödülü kazandı. Stephen Sondheim'ın Sunday in the Park With George'unda Jake Gyllenhaal ile Dot rolünü paylaştı ve Showtime'ın büyük beğeni toplayan Masters of Sex'inde Betty'yi canlandırdı. Broadway'deki diğer rolleri arasında Sylvia'daki Sylvia, Kinky Boots'taki orijinal Lauren (Clarence Derwent Ödülü, Tony, Drama Desk, Outer Critics Circle adaylıkları), Wicked'deki Glinda, Hair'deki Jeannie ve Legally Blonde the Musical'daki orijinal Margot yer almaktadır. Broadway dışındaki rolleri arasında Encores! 'da George ile Parkta Pazar'da Dot, Public Theatre'ın Shakespeare in the Park'ı için Delecorte Tiyatrosu'nda Midsummer Night's Dream'de Helena, Rent'te Maureen ve Dogfight'ta Marcie yer alıyor. Diğer televizyon ve film kredileri arasında American Crime Story: Versace, Fox'ta The Rocky Horror Picture Show'da Columbia, Nurse Jackie, The Big C, Law&Order SVU, Smash, Unicorn Store, Sex and the City, Better Off Single, Top Five, Rachel Getting Married, Frozen. Eleştirmenlerce beğenilen solo gösterisi Annaleigh Ashford: Lost in the Stars Live at 54 Below 2016 yılında Broadway Records tarafından yayımlandı.