Seth Woodbury MacFarlane, New England'ın küçük bir kasabası olan Kent, Connecticut'ta doğdu ve burada bir kabul ofisi çalışanı olan annesi Ann Perry (Sager), bir hazırlık okulu öğretmeni olan babası Ronald Milton MacFarlane ve şu anda bir seslendirme sanatçısı ve şarkıcı olan kız kardeşi Rachael MacFarlane ile birlikte yaşadı. İngiliz, İskoç ve İrlanda kökenli olan ve Mayflower yolcularının soyundan gelen Seth, Rhode Island School of Design'da animasyon eğitimi aldı ve mezun olduktan sonra Hanna-Barbera Productions (şimdiki adıyla Cartoon Network Studios) tarafından işe alınarak Johnny Bravo (1997) ve İnek ve Tavuk (1997) dizilerinde animatör ve yazar olarak çalıştı. Ayrıca Walt Disney Animation için Jungle Cubs (1996) adlı TV dizisinde yazar olarak çalıştı. Başlangıçta MADtv'de (1995) ara bölüm olarak kullanılması düşünülen The Life of Larry'yi (1995) yarattı. Ne yazık ki anlaşma suya düştü ancak birkaç ay sonra FOX'taki yöneticiler onu ofislerine çağırdı ve sonunda Family Guy (1999) olacak dizinin pilot bölümünü yaratması için 50.000 dolar verdi.Family Guy'ın çıkışından bu yana MacFarlane iki televizyon şovu daha yaratmaya devam etti-American Dad! (2005) ve The Cleveland Show (2009). MacFarlane kariyeri boyunca aktör, seslendirme sanatçısı, animatör, yazar, yapımcı, yönetmen, komedyen ve şarkıcı olarak kendini kanıtlamaya başladı. MacFarlane ayrıca Ayı Teddy (2012) ve devam filmi Ayı Teddy 2 (2015) ile Yeni Başlayanlar İçin Vahşi Batı (2014) filmlerini yazdı, yönetti ve oynadı. Şarkını Söyle (2016) adlı animasyon müzikalde fare Mike'ı seslendirdi.