Aktör Gene Lockhart ve Kathleen Lockhart'ın kızı olarak 25 Haziran 1925'te New York'ta doğan June Lockhart, ilk profesyonel çıkışını sekiz yaşındayken Metropolitan Opera prodüksiyonu olan "Peter Ibbetson" oyununda rüya sekansında Mimsey rolüyle yaptı. Lockhart ailesi 1930'ların ortalarında Kaliforniya'ya taşındı ve baba Gene burada ekranın en iyi karakter oyuncularından biri olarak uzun bir kariyer yaptı. June ilk kez MGM'in A Christmas Carol (1938) versiyonunda, uygun bir şekilde Gene Lockhart ve Kathleen Lockhart'ın kızını canlandırarak ekrana geldi. June 1947'de John Loder'la oynadığı "For Love or Money" adlı komedide başrol oynayarak Broadway'e adım atmadan önce bir düzine ya da daha fazla filmde rol aldı. Açılış gecesinde ayakta alkışlandı; bir eleştirmen onun ilk çıkışını Helen Hayes ve Margaret Sullavan'ın ilk büyük hitleriyle karşılaştırdı. Bir gecede Broadway'in gözdesi olan oyuncu, bu oyundaki performansıyla Tony Ödülü, Donaldson Ödülü, Tiyatro Dünyası Ödülü ve Associated Press'in Drama dalında Yılın Kadını ödülünü kazandı. Televizyonda Lassie (1954) ve Lost in Space (1965) gibi popüler dizilerde başrol oynadı.