John Phillip Stamos, Cypress, California'da bir model olan Loretta (Phillips) ve bir restoran işletmecisi olan William Stamos'un çocuğu olarak dünyaya geldi. Babası Yunan kökenliydi ve aile soyadı aslen "Stamotopoulos" idi. John'un her ikisi de öğretmen olan Janeen ve Alaina adında iki kız kardeşi vardır. İlk profesyonel rolü 1982-1984 yılları arasında gündüz dizisi General Hospital'da (1963) Blackie Parrish rolüydü ve bu rolle iki Soap Opera Digest Ödülü (1982 ve 1983) kazandı. 1987 yılında Bizim Ev (1987) dizisinde Jesse rolüne başladı ve sekiz yıl süren bu rol bugüne kadar en bilinen rolü oldu. Onun isteği üzerine Bizim Ev (1987) yazarları John'un Yunan mirasını vurgulamak için karakterine orijinal karakterin adı olan Cochran yerine Katsopolis soyadını verdi. 1985'ten beri ara sıra The Beach Boys ile davul çaldı ve "Hot Fun in the Summertime" videosunu yönetti. Kariyerini 1995 yılında Broadway'de "How to Succeed in Business Without Really Trying!" oyununda J. Pierrepont Finch rolünü alarak genişletti ve sadece müzikal yeteneklerini değil, dans yeteneğini de sergiledi. 19 Eylül 1998'de MTV'nin House of Style (1989) programından model Rebecca Romijn ile evlendi ve bu her ikisinin de ilk evliliğiydi. Resmi olarak 1 Mart 2005 tarihinde boşandılar.