Sean Pertwee ünlü bir İngiliz tiyatro ailesinin çocuğu olarak dünyaya geldi. Esas olarak bir komedi oyuncusu olan ve Doctor Who (1963), Worzel Gummidge (1979), radyo komedi dizisi "The Navy Lark" ve birkaç "Carry On" filmindeki başrolleriyle tanınan Jon Pertwee'nin oğludur. Amcası Michael Pertwee ve büyükbabası Roland Pertwee üretken senaristler ve oyun yazarlarıydı ve babasının kuzeni Bill Pertwee, İngiltere'nin en popüler sitcomlarından biri olan Dad's Army'nin (1968) düzenli bir oyuncusuydu. Kız kardeşi Dariel Pertwee, çeşitli ekran rolleri olan bir oyuncudur.Bristol Old Vic Tiyatro Okulu'nda eğitim aldıktan sonra, Pertwee oyunculuğa başladı Royal Shakespeare Company'de kariyerine başladı ve özellikle Deborah Warner'ın yönettiği Titus Andronicus'ta başrol oynadı. Üç yıllık turnenin ardından Pertwee klasik eğitimine BBC için Julius Caesar ve C4 filmleri için Michael Bogdanov'un yapımcılığında Macbeth'i oynayarak devam etti. O zamandan beri hem film hem de televizyon çalışmalarıyla hemen tanınan Pertwee, sinemaya Joe Orton biyografisi Prick Up Your Ears (1987) ile başladı, ardından Paul W.S. Anderson'ın Shopping (1994) filminde Jude Law ile birlikte oynadı, ardından Ufuk Faciası (1997), Asker (1998), Kıyamet Günü (2008), Love, Honour and Obey (2000) filmlerinde rol aldı ve Neil Marshall'ın Dog Soldiers (2002) filminde başrol oynadı. Diğer önemli film kredileri arasında Deadly Voyage (1996); Wild Bill (2011); Pertwee'nin Catherine Zeta-Jones ve Ewan McGregor ile birlikte oynadığı Blue Juice (1995); ve Samuel L. Jackson ve Robert Carlyle ile birlikte oynadığı The 51st State (2001) sayılabilir. Pertwee, Alan Partridge'de Steve Coogan'ın karşısında oynadı: Pertwee, CBS dizisi Elementary'de (2012) Sherlock Holmes rolündeki Jonny Lee Miller ile birlikte Lestrade'in ikonik rolünü oynadı. Ayrıca The Musketeers (2014), Agatha Christieལs Poirot (1989), ödüllü Luther (2010) dizilerinde rol almış ve James Nesbitt ile birlikte son derece popüler Cold Feet (1997) dizisinde tekrar eden bir rol üstlenmiştir. Televizyondaki diğer rolleri arasında Skins (2007), Bodyguards (1996), Jean Reno ile Jo (2013), Chancer (1990), The Young Indiana Jones Chronicles (1992), Sean Bean ile Clarissa (1991) ve Joseph Fiennes ve Eva Green ile Camelot (2011) bulunmaktadır.Pertwee, Batman'in gelişinden önceki yıllarda Komiser James Gordon'un Gotham Şehri'nde öne çıkmasının ardındaki hikâyeyi anlatan Warner Bros. dizisi Gotham'da (2014) soğukkanlı uşak Alfred Pennyworth rolünde yer aldı. Popüler bir seslendirme sanatçısıdır ve sık sık belgeseller, animasyon filmleri, reklamlar, TV dizileri ve Fable, Killzone ve Assassin's Creed dahil olmak üzere video oyunlarını seslendirirken duyulabilir.